Au cours du d\u00e9veloppement de nouveaux traitements et de m\u00e9dicaments innovants, on teste aussi les substances actives chez l\u2019animal. Il s\u2019agit de d\u00e9terminer l\u2019efficacit\u00e9 et la tol\u00e9rance en recherche pr\u00e9clinique. On \u00e9l\u00e8ve \u00e0 cet effet plus d\u2019animaux que le nombre dont on a besoin. Pourquoi?<\/strong><\/p>\n\n\n\n Pour plusieurs raisons: la principale est d\u2019assurer la pertinence scientifique de l\u2019exp\u00e9rience sur l\u2019animal. Bien souvent, pour une question pr\u00e9cise, on a besoin d\u2019animaux de laboratoire pr\u00e9sentant des caract\u00e9ristiques g\u00e9n\u00e9tiques sp\u00e9ci – fiques. Pendant l\u2019\u00e9levage de ces animaux sp\u00e9cifiques, d\u2019autres animaux naissent forc\u00e9ment.<\/p>\n\n\n\n Vous parlez de caract\u00e9ristiques g\u00e9n\u00e9tiques. Quel est le r\u00f4le des lois de l\u2019h\u00e9r\u00e9dit\u00e9 dans le fait que plus d\u2019animaux naissent que le nombre utilis\u00e9 dans l\u2019exp\u00e9rience?<\/strong><\/p>\n\n\n\n L\u2019\u00e9levage de lign\u00e9es g\u00e9n\u00e9tiquement modifi\u00e9es, et c\u2019est ce dont je parle ici, est soumis \u00e0 des lois biologiques. D\u00e8s la deuxi\u00e8me moiti\u00e9 du XIXe si\u00e8cle, Gregor Mendel d\u00e9couvrait sur le pois comment fonctionne l\u2019h\u00e9r\u00e9dit\u00e9. Et ces principes, que nous appelons aujourd\u2019hui les lois de Mendel, s\u2019appliquent \u00e0 l\u2019\u00eatre humain, \u00e0 la souris, \u00e0 tous les \u00eatres vivants. On ne peut pas passer outre. C\u2019est pourquoi, in\u00e9vita- blement, certains des animaux qui naissent ne portent pas les caract\u00e9ristiques g\u00e9n\u00e9tiques requises.<\/p>\n\n\n\n Pouvez-vous donner un exemple?<\/strong><\/p>\n\n\n\n D\u00e8s l\u2019\u00e9levage, par exemple d\u2019une lign\u00e9e de souris ne pr\u00e9sentant qu\u2019une seule modification g\u00e9n\u00e9tique, certains des animaux qui naissent sont porteurs de cette caract\u00e9ristique souhait\u00e9e, d\u2019autres non. Il ne peut pas en \u00eatre autrement, c\u2019est la loi de Mendel. Mais les questions biologiques pos\u00e9es, et donc aussi les mod\u00e8les animaux et murins utilis\u00e9s, sont de plus en plus complexes. Nous avons aujourd\u2019hui environ 50% d\u2019animaux qui ont une modification g\u00e9n\u00e9tique, environ 30% qui en ont deux et environ 20% qui en ont trois ou plus.<\/p>\n\n\n\n Je l\u2019explique volontiers \u00e0 l\u2019aide d\u2019un exemple: disons que le but de l\u2019\u00e9le- vage d\u2019animaux pour une exp\u00e9rience est de r\u00e9unir trois caract\u00e9ristiques g\u00e9n\u00e9tiques A, B et C dans une lign\u00e9e de souris. La caract\u00e9ristique A est un commutateur g\u00e9n\u00e9tique pr\u00e9sent dans la lign\u00e9e murine A. La caract\u00e9ristique B, pr\u00e9sente dans la lign\u00e9e murine B, est un g\u00e8ne cible li\u00e9 par exemple \u00e0 une maladie et susceptible de r\u00e9pression (d\u00e9sactivation) par un commutateur g\u00e9n\u00e9tique. La caract\u00e9ristique C, pr\u00e9sente dans la lign\u00e9e murine C, est un colorant fluorescent susceptible de promotion (activation) par un commu- tateur g\u00e9n\u00e9tique. L\u2019\u00e9levage de la lign\u00e9e de souris ABC souhait\u00e9e pour cette exp\u00e9rience est complexe, car il n\u2019est pas possible de combiner les trois carac- t\u00e9ristiques \u00e0 une m\u00eame \u00e9tape de re- production. On ne peut accoupler en une \u00e9tape qu\u2019une souris m\u00e2le porteuse de la caract\u00e9ristique A avec une souris femelle porteuse de la caract\u00e9ristique B. Les descendants portent les caract\u00e9ristiques A et B. \u00c0 l\u2019\u00e9tape suivante, on peut accoupler une souris AB avec une souris porteuse de la caract\u00e9ristique C. Ce processus d\u2019\u00e9levage en plusieurs \u00e9tapes signifie qu\u2019on a plus de naissances d\u2019animaux que le nombre employ\u00e9 dans l\u2019exp\u00e9rience.<\/p>\n\n\n\n Que fait-on des animaux qui ne sont pas employ\u00e9s dans l\u2019exp\u00e9rience?<\/strong><\/p>\n\n\n\n Les animaux surnum\u00e9raires issus de pro- cessus d\u2019\u00e9levage complexes sont par exemple utilis\u00e9s comme animaux sentinelles. Cela veut dire qu\u2019ils servent \u00e0 surveiller l\u2019\u00e9tat de sant\u00e9 des colonies de l\u2019exp\u00e9rience. Les animaux sentinelles vivent dans des cages qui leur sont r\u00e9serv\u00e9es et on les met r\u00e9guli\u00e8rement en contact avec de la liti\u00e8re et\/ou des \u00e9l\u00e9ments de cages utilis\u00e9s pour d\u2019autres animaux et donc, le cas \u00e9ch\u00e9ant, avec des agents pathog\u00e8nes.<\/p>\n\n\n\n Un v\u00e9t\u00e9rinaire examine r\u00e9guli\u00e8rement ces animaux, ce qui permet de contr\u00f4ler \u00e0 intervalles r\u00e9guliers l\u2019\u00e9tat d\u2019hygi\u00e8ne de la colonie. Par ailleurs, nous proposons les animaux d\u2019\u00e9levage qui n\u2019ont pas acquis la modification g\u00e9n\u00e9tique voulue pour l\u2019exp\u00e9rience \u00e0 nos chercheurs pour d\u2019autres travaux de recherche ou d\u2019entra\u00eenement, par exemple lorsqu\u2019il s\u2019agit de s\u2019exercer \u00e0 r\u00e9aliser une nouvelle op\u00e9ration chirurgicale telle que la mise en place d\u2019une micropuce.<\/p>\n\n\n\n Y a-t-il des efforts et des possibilit\u00e9s de r\u00e9duire autant que possible le nombre d\u2019animaux \u00e9lev\u00e9s?<\/strong><\/p>\n\n\n\n C\u2019est notre ambition et, ces derni\u00e8res ann\u00e9es, nous avons accompli des progr\u00e8s substantiels! Aussi bien dans les cas simples, porteurs d\u2019une seule modification g\u00e9n\u00e9tique, que dans les cas plus complexes, une planification soigneuse et des strat\u00e9gies d\u2019\u00e9levage intelligentes permettent de r\u00e9duire le nombre d\u2019animaux. Pour cela, nous avons centralis\u00e9 l\u2019\u00e9levage des animaux. Des sp\u00e9cialistes exp\u00e9riment\u00e9s dans le domaine de l\u2019\u00e9levage et de la g\u00e9n\u00e9tique forment aujourd\u2019hui le lien entre les chercheurs et les gardiens d\u2019animaux. Leur mission est de planifier, contr\u00f4ler et mettre en \u0153uvre des strat\u00e9gies d\u2019\u00e9levage complexes. Mettre en \u0153uvre signifie disposer \u00e0 un moment pr\u00e9cis pour une exp\u00e9rience pr\u00e9cise du nombre requis d\u2019animaux porteurs de caract\u00e9- ristiques g\u00e9n\u00e9tiques sp\u00e9cifiques, c\u2019est\u00e0-dire du g\u00e9notype voulu, et de l\u2019\u00e2ge voulu. Des sch\u00e9mas d\u2019\u00e9levage intelligents permettent clairement de r\u00e9duire le nombre d\u2019animaux \u00e9lev\u00e9s. Cependant, il faut bien comprendre qu\u2019en rai- son des lois de la biologie, il n\u2019est pas possible d\u2019\u00e9viter compl\u00e8tement les animaux surnum\u00e9raires.<\/p>\n\n\n\n Les bons animaux et le bon nombre. Voil\u00e0 qui semble ambitieux. Quelle est la raison de cette pr\u00e9cision?<\/strong><\/p>\n\n\n\n Il en va de la robustesse statistique de l\u2019exp\u00e9rience. Les processus biologiques pr\u00e9sentent toujours des variations, y compris chez des animaux g\u00e9n\u00e9tiquement identiques. Cela veut dire que deux animaux identiques ne vont pas forc\u00e9ment se comporter \u00e0 100% de la m\u00eame mani\u00e8re dans une exp\u00e9rience. Pour que l\u2019exp\u00e9rience fournisse tout de m\u00eame des r\u00e9sultats pertinents et robustes, on a besoin, du point de vue statistique, d\u2019un certain nombre d\u2019animaux qu\u2019un biostatisticien calcule avec pr\u00e9cision.<\/p>\n\n\n\n Pourquoi l\u2019\u00e2ge des animaux est-il si important?<\/strong><\/p>\n\n\n\n La fourchette d\u2019\u00e2ge joue un r\u00f4le car l\u2019effet que l\u2019on souhaite mesurer, le ph\u00e9notype, se d\u00e9veloppe et se caract\u00e9rise avec le temps. Il est donc important d\u2019avoir un groupe d\u2019\u00e2ge comparable. En effet, si un animal \u00e2g\u00e9 de huit semaines se comporte autrement qu\u2019un animal \u00e2g\u00e9 de douze semaines, on pourra difficilement comparer les donn\u00e9es et l\u2019exp\u00e9rience ne fournira pas d\u2019informations robustes ou pertinentes. Il y a un autre facteur li\u00e9 \u00e0 l\u2019\u00e2ge des animaux de laboratoire pour lequel j\u2019aimerais vous donner deux exemples: la maladie d\u2019Alzheimer se manifeste en g\u00e9n\u00e9ral \u00e0 un \u00e2ge avanc\u00e9. On produit donc pour cela des mod\u00e8les murins transg\u00e9niques de souris \u00e2g\u00e9es. La recherche immunologique a lieu au contraire sur des animaux jeunes, car le syst\u00e8me immunitaire fonctionne et r\u00e9pond mieux chez l\u2019animal jeune que chez l\u2019animal \u00e2g\u00e9.<\/p>\n\n\n\n Dans quelle mesure l\u2019homog\u00e9n\u00e9it\u00e9 des animaux de laboratoire est- elle pertinente pour la qualit\u00e9 ou la robustesse de l\u2019exp\u00e9rience?<\/strong><\/p>\n\n\n\n Nous recherchons en g\u00e9n\u00e9ral la plus grande homog\u00e9n\u00e9it\u00e9 possible dans un groupe. En particulier dans la recherche biologique et m\u00e9dicale, on \u00e9tudie des processus dans lesquels on veut parfois observer et mesurer d\u2019infimes modifications. Pour y parvenir, il faut r\u00e9duire ce que nous appelons les bruits parasites. Cela veut dire qu\u2019aussi bien les facteurs internes, c\u2019est-\u00e0-dire l\u2019homog\u00e9n\u00e9it\u00e9, que les facteurs externes, sont constants. Les facteurs externes sont par exemple les soins dispens\u00e9s par le gardien d\u2019animaux, la temp\u00e9rature de l\u2019animalerie, les vibrations et sons ambiants, le cycle de luminosit\u00e9 ou encore l\u2019odeur. Les facteurs internes, ce que nous appelons homog\u00e9n\u00e9it\u00e9 des animaux, comprend par exemple l\u2019\u00e2ge des animaux.<\/p>\n\n\n\n Pour certaines exp\u00e9riences, il est aussi important d\u2019observer soigneusement l\u2019arbre g\u00e9n\u00e9alogique des animaux, car les animaux inclus dans l\u2019exp\u00e9rience et les animaux t\u00e9moins doivent \u00eatre des fr\u00e8res et s\u0153urs d\u2019une m\u00eame port\u00e9e. La flore intestinale des animaux peut aussi jouer un r\u00f4le. C\u2019est ainsi que deux animaux identiques ou issus d\u2019une lign\u00e9e identique de deux institutions diff\u00e9rentes ont en g\u00e9n\u00e9ral une flore intestinale l\u00e9g\u00e8rement diff\u00e9rente, et on peut le mesurer dans certaines exp\u00e9riences.<\/p>\n\n\n\n Quelles technologies pouvez-vous utiliser pour r\u00e9duire le nombre d\u2019animaux utilis\u00e9s dans la recherche?<\/strong><\/p>\n\n\n\n Il y a des animaux qui sont uniquement dans un \u00e9levage de maintien et que l\u2019on ne continue \u00e0 \u00e9lever que parce que les scientifiques ne veulent pas perdre des animaux porteurs de certaines modifications g\u00e9n\u00e9tiques ou autres caract\u00e9ristiques.<\/p>\n\n\n\n Pour en r\u00e9duire le nombre, on peut employer la cryoconservation. Il s\u2019agit de congeler les embryons dans l\u2019azote liquide \u00e0 une temp\u00e9rature inf\u00e9rieure \u00e0 \u2013 195 degr\u00e9s. Au besoin, on peut les implanter \u00e0 une m\u00e8re porteuse pour red\u00e9marrer l\u2019\u00e9levage. Une m\u00e9thode relativement nouvelle est la technique CRISPR\/Cas9. Il s\u2019agit d\u2019une technique de modification du g\u00e9nome qui permet d\u2019\u00e9quiper les animaux plus vite et plus pr\u00e9cis\u00e9ment de nouvelles modifi- cations g\u00e9n\u00e9tiques. L\u2019effet est qu\u2019on \u00e9conomise certaines \u00e9tapes de l\u2019\u00e9levage et qu\u2019on peut introduire plusieurs caract\u00e9ristiques souhait\u00e9es \u00e0 la fois dans le g\u00e9nome des animaux d\u2019origine d\u2019une lign\u00e9e murine.<\/p>\n\n\n\n \u00abL\u2019\u00e9l\u00e9ment d\u00e9cisif pour la r\u00e9duction de l\u2019exp\u00e9ri- mentation animale sont des sch\u00e9mas d\u2019\u00e9levage intelligents et l\u2019\u00e9change r\u00e9gulier avec toutes les personnes impliqu\u00e9es.\u00bb<\/p>\n<\/blockquote>\n\n\n\n Mais comme toute nouvelle m\u00e9thode, CRISPR\/Cas9 renferme aussi de nouveaux d\u00e9fis qu\u2019il faut avoir pr\u00e9sents \u00e0 l\u2019esprit si nous voulons utiliser cette technique de mani\u00e8re transparente. Pour moi, l\u2019\u00e9l\u00e9ment d\u00e9cisif reste la r\u00e9duction de l\u2019exp\u00e9rimentation animale par le biais de sch\u00e9mas d\u2019\u00e9levage intelligents et d\u2019un \u00e9change r\u00e9gulier avec toutes les personnes impliqu\u00e9es, y compris avec d\u2019autres instituts, pour rendre l\u2019\u00e9levage des animaux d\u2019exp\u00e9rience plus efficient.<\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":" Entretien avec Dr. Daniel Breutstedt Au cours du d\u00e9veloppement de nouveaux traitements et de m\u00e9dicaments innovants, on teste aussi les substances actives chez l\u2019animal. Il s\u2019agit de d\u00e9terminer l\u2019efficacit\u00e9 et la tol\u00e9rance en recherche pr\u00e9clinique. On \u00e9l\u00e8ve \u00e0 cet effet plus d\u2019animaux que le nombre dont on a besoin. Pourquoi? 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